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凱氏定氮法測(cè)定醬油中全氮含量的不確定度評(píng)定

更新時(shí)間:2010-10-29      點(diǎn)擊次數(shù):5384
      醬油是我們?nèi)粘I钪?的調(diào)味品之一,是我國(guó)傳統(tǒng)的釀造食品,以大豆為主要原料,進(jìn)行微生物發(fā)酵,將蛋白質(zhì)分解為肽、胨及氨基酸,使產(chǎn)品具有鮮味,且具有豐富的營(yíng)養(yǎng)。全氮指標(biāo)是衡量釀造醬油產(chǎn)品質(zhì)量好壞的重要指標(biāo)之一,所以對(duì)產(chǎn)品檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性應(yīng)嚴(yán)格把握。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)方法《GB1818622000 釀造醬油》中采用凱氏定氮法測(cè)定醬油中全氮的含量http://www.dsddy.cn/ ,其測(cè)量不確定度來(lái)源于樣品移取、消化、蒸餾、稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液及滴定等過(guò)程。通過(guò)對(duì)各個(gè)不確定度分量的計(jì)算合成,找出影響測(cè)量不確定度的因素,并對(duì)各個(gè)不確定度分量進(jìn)行評(píng)估,zui終給出樣品中全氮含量的標(biāo)準(zhǔn)不確定度及擴(kuò)展不確定度。
1  實(shí)驗(yàn)操作及數(shù)據(jù)
1.1  方法依據(jù)及原理
按《GB18186-2000 釀造醬油》6. 3 規(guī)定的方法進(jìn)行。醬油與硫酸和催化劑一同加熱消化,使蛋白質(zhì)分解的氨與硫酸結(jié)合成硫酸銨,然后加堿蒸餾使氨游離,用硼酸吸收后,再以鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定,根據(jù)鹽酸的消耗量乘以換算系數(shù),即為蛋白質(zhì)的含量。
1. 2  實(shí)驗(yàn)條件及操作簡(jiǎn)述
實(shí)驗(yàn)室溫度在(20 ±5) ℃,樣品混勻后, 取2.00 mL醬油消化, 消化*后, 加堿蒸餾, 用2. 00 mL硼酸溶液接收,用0. 1012 moL/ L 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定餾出液至紫紅色為終點(diǎn),記錄消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積V 為10. 20 ,10. 00 ,10. 10 ,10. 00 ,10. 10 ,10. 20 mL ,同時(shí)作空白試驗(yàn)V0 為0. 30 mL 。
1.3  評(píng)定依據(jù)
JJ F1059-1999 測(cè)量不確定度評(píng)定與表示。
2  測(cè)量數(shù)學(xué)模型
根據(jù)公式: X =
其中:
X  樣品中蛋白質(zhì)的含量,g/ L ;
V  樣品消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,mL ;
V0  試劑空白消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積,
mL ;
CHCL  鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度,moL/ L ;
V2  用2. 00 mL 移液管移取樣品消化液的體積,mL ;
0. 014  1moL/ L 鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1mL 相當(dāng)于氮的克數(shù);
數(shù)學(xué)模型可以簡(jiǎn)化為: X =
由此可以看出:對(duì)測(cè)量結(jié)果不確定度有影響的因素主要是取樣量、消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積數(shù)及鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。從數(shù)學(xué)模型可以看出,各影響參數(shù)相互獨(dú)立,各參數(shù)的不確定度直接對(duì)檢測(cè)結(jié)果不確定度產(chǎn)生影響,合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度可用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度進(jìn)行合成, 按照J(rèn)J F1059-1999 中6. 7 ,合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度u (C) 進(jìn)一步演化為對(duì)X 的相對(duì)合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度的估算為:
 
其中: uc ( X)  X 的合成標(biāo)準(zhǔn)不確定度,g/ L ;
u( rep)  重復(fù)實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度;
u(V - V 0 )  樣品扣除試劑空白后消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液帶來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度,mL ;
u( CHCl )  鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的標(biāo)準(zhǔn)不確定度,moL/ L ;
u(V 1 )  用2. 00 mL 移液管移取樣品消化液帶來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度,mL 。
3  不確定度來(lái)源分析
從分析過(guò)程和數(shù)學(xué)模型分析,全氮測(cè)定不確定度的來(lái)源主要是樣品取樣、消化、蒸餾、滴定、標(biāo)準(zhǔn)溶液消耗體積及重復(fù)檢測(cè)所帶來(lái)的不確定因素,還有實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件變化帶來(lái)的不確定度,綜合歸納見(jiàn)圖1 。
 
4  不確定度分量量化
4.1  樣品復(fù)測(cè)帶來(lái)的不確定度,屬A 類標(biāo)準(zhǔn)不確定度
重復(fù)6 次測(cè)定蛋白質(zhì)含量所引起的不確定度,主要考慮A 類不確定度。
 
4.2  樣品扣除試劑空白后消耗鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液帶來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(V - V0 ) 的量化
10 mL 滴定管的標(biāo)準(zhǔn)不確定度來(lái)源: ①滴定管的不確定度,按檢定證書給定為±0. 02 mL ,按照均勻分布換算成標(biāo)準(zhǔn)不確定度u1 。②滴定體積的重復(fù)性,已通過(guò)重復(fù)性實(shí)驗(yàn)考慮過(guò)了,包含在u(A) 內(nèi)。③滴定管和溶液的溫度與校正時(shí)的溫度不同引起的體積不確定度,本次實(shí)驗(yàn)溫度為25 ℃,水的體積膨脹系數(shù)為2. 1 ×10 - 4 / ℃,假設(shè)溫度變化是按照均勻分布,換算成標(biāo)準(zhǔn)不確定度u2 ,二種分量合成得到體積的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u (V- V0 ) 。
10 mL 滴定管校準(zhǔn):
溫度校正:
 
 
4. 3  鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)準(zhǔn)帶來(lái)的標(biāo)準(zhǔn)不確定度u(CHCL )
鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液標(biāo)定按《GB/ T 601-2002 化學(xué)試劑標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的制備》規(guī)定:稱取0. 2000 g基準(zhǔn)無(wú)水碳酸鈉試劑,加水50 mL ,加入指示劑,用HCL 標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至由綠色變?yōu)榘导t色為終點(diǎn),消耗HCL 溶液體積數(shù)V3 為37. 35 mL ,同時(shí)做空白試驗(yàn),消耗HCL 溶液體積V4 為0. 05 mL ,計(jì)算公式為: 。
式中:
m  無(wú)水碳酸鈉的質(zhì)量的準(zhǔn)確數(shù)值,單位為克(g) ;
V3  鹽酸溶液的體積的數(shù)值,單位為毫升(mL) ;
V4  空白試驗(yàn)鹽酸溶液的體積的數(shù)值,單位為毫升(mL) ;
M  無(wú)水碳酸鈉的摩爾質(zhì)量的數(shù)值,單位為克每摩爾(g/ moL) [M(1/ 2Na2 CO3 ) = 52. 994 ] 。
4. 3. 1  標(biāo)定HCL 標(biāo)準(zhǔn)溶液引入的不確定度
用電子天平稱量基準(zhǔn)無(wú)水碳酸鈉,天平精度為0. 1 mg ,被視為矩形分布, k =  ,換算為標(biāo)準(zhǔn)不確定度為: u( m) =0. 1/ = 0. 058 mg。
相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)不確定度為:

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